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Fórmula del Estándar Cuando no se conoce el ε M del compuesto a cuanti fi car, la concentración desconocida puede determinarse sobre la base de un sólo estándar, de acuerdo a la siguiente ecuación (ecuación 4.13) : A s · C MP · V i V f MP = A MP · C f · V i V f S (ecuación 4.13) donde, A s y A MP son las absorbancias del estándar y muestra problema, respectivamente. V i corresponde al volumen de la solución estándar o de la muestra problema ocupado en el ensayo para cuanti fi car. V f corres- ponde al volumen fi nal del ensayo ocupado para cuanti fi car. C s y C MP corresponden a las concentraciones de las soluciones estándar y muestra problema, respectivamente. Ambas concentraciones se re fi eren a las ori- ginales sin la dilución propia del ensayo ocupado para cuanti fi car.

calibrado utilizando una solución de concentración conocida a la cual se denomina solución patrón o estándar . En cualquier caso, la absorbancia de una solución es la resultante de la absorbancia del soluto, cuya concentración se desea conocer, y la de otros componentes del sistema (solventes, reactivos) que absorben tam- bién a esa longitud de onda. Estos compuestos se denominan interferen- cias. Se debe descartar la absorbancia de las interferencias y para ello es necesario hacer siempre una muestra que contenga todos los componen- tes del sistema menos aquel que se desea medir. Esta muestra se llama BLANCO y la absorbancia de éste debe restarse a la muestra problema y a los patrones, o bien, con el blanco se calibra el instrumento a absorban- cia igual a 0, o sea 100% de transmitancia.

Curva de calibrado lineal

0,3

y = 0,0504x R 2 = 0,9972

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05 Absorbancia

0

0

1

2

3

4

5

6

Concentración mg/ml

Figura 4.8. Curva de calibrado que relaciona la absorbancia de una muestra con su concen- tración de manera lineal (R 2 = 0,9972).

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